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植物核蛋白提取试剂盒-非酶法图片
产品货号:
HR0103
中文名称:
植物核蛋白提取试剂盒-非酶法
英文名称:
Plant nuclear protein extraction kit
产品规格:
50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本试剂盒适用于从各种植物细胞和实体组织,如叶片、根、种子等植物组织中提取核蛋白。提取过程简单方便,可在1小时内完成。制备的核蛋白不仅纯度高,保持天然活性,而且绝少交叉污染。


本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解植物核组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。


本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白,可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。


本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度盐成分,不可直接用于2D电泳,如下游实验需直接用于等电聚焦、双向电泳,请使用其他货号产品。也可将最后样品除盐后再用于2D电泳,用脱盐柱脱盐处理。




  • 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
  • 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
  • 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性。



组分50T100T
试剂A:植物核蛋白提取液A100mL200mL
试剂B:植物核蛋白提取液B15mL30mL
试剂C:蛋白酶抑制剂混合物100μL200μL

保存:蛋白提取液2~8℃保存;蛋白酶抑制剂-20℃保存。提取液A长期不用请置-20℃保存,有效期1年。


  • 蛋白酶抑制剂未开盖前也可以2~8℃保存,开盖使用后-20℃保存。
  • 蛋白酶抑制剂在2~8℃是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。



匀浆机/Dounce匀浆器、涡旋混匀器、振荡器、100μm细胞筛、PBS、蛋白定量试剂盒


  • 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
  • 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  • 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
  • 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。



  • 提取液制备:
    每300μL提取液B中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
    注:
    ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
    ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完,再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
  • 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200~500mg植物组织样本用手术剪刀尽可能剪碎,加入1mL提取液A后用匀浆机充分匀浆或者用Dounce匀浆器充分匀浆。
    注:
    ● 匀浆尽可能充分,至无明显可见固体。
    ● 培养细胞直接收集细胞后用Dounce匀浆器匀浆,匀浆后加提取液A混匀后直接进行以下步骤离心。
    ● 处理组织样本如无匀浆机,也可先加少量提取液A后用Dounce匀浆器充分匀浆后再加提取液A混匀。
  • 将匀浆用100μm细胞筛过滤。
    注:
    ● 液体量少时可以加入1~2mL PBS混匀后再用细胞筛过滤。
    ● 没有细胞筛时可以不过滤,将匀浆液静置1分钟,待大的没有破碎的组织块自然沉降,吸取上清。
    ● 部分粘液较多的植物样本可能难以吸取,可以将1mL吸头的口剪掉一点再吸。
  • 将滤液在100×g条件下离心3分钟,弃沉淀,收集上清。
  • 在1000×g条件下离心10分钟,弃上清,收集沉淀。
  • 在沉淀中加入200~300μL提取液B,充分混匀。
  • 置振荡器2~8℃振荡30分钟。
    注:
    ● 用振荡器/摇床的较低转速,保持液体有轻微晃动即可。
    ● 无低温震荡条件可不震荡,在2~8℃静置,稍微延长处理时间,中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
  • 在4℃,12000×g条件下离心15分钟。
  • 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到核蛋白。
  • 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
    注:
    ● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品:HR0329。
    ● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。



  • 蛋白浓度低?
    植物核蛋白丰度比较低,在条件允许的情况下,尽可能增加样本量。处理部分样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。只要适当增加试剂A的匀浆次数,并适当延长试剂A和B的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  • 用什么方法定量蛋白?
    建议用BCA法。不适合用Bradford法,因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用Bradford法定量。
  • 提取时出现胶状沉淀?
    蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下,可以直接离心取上清进行后续实验即可;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理,300w/10秒间隔10秒,超声3分钟,随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,
    不必进行超声处理。
  • 提取的蛋白具有活性吗?
    本试剂盒不含有离子型去垢剂组份,不破坏蛋白的结构,没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏,蛋白均保持其天然构象和活性。

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